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    人ELISA试剂盒的双位点一步法的应用
    发布时间:2015-05-05   点击次数:2257次

    操作步骤

    1、将1个McAb与固相载体连接,形成固相McAb。人ELISA试剂盒洗涤除去未结合物。

    2、同时加入待检标本和酶标McAb,温育,是待检抗原和固相McAb及酶标McAb反应形成双抗体夹心复合物。洗涤除去未结合物。

    3、加底物显色。

    适用于双抗体夹心法的人ELISA试剂盒,有些也可用双位点一步法检测。如HBsAg同样可用此法进行检测,其原理为:将纯化的抗HBs吸附于固相载体表面,加入待检血清(或血浆),同时加入辣根过氧化物酶标记的另一个抗HBs(酶结合物),如血清或血浆中含有HBsAg,则通过温育形成固相McAb-HBsAg-酶标McAb复合物,加入底物,通过显色反应进行测定。若血清或血浆中不含HBsAg,通过洗涤除去未结合物,

    加底物后就不显色。

    1.吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
    2.液体全部加入酶标孔后,将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
    3.孵育时要使盖板膜封好酶标板,防止水分蒸发,以防曲线不成线性。
    4.由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
    5.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
    6.吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
    7.检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
    8.底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
    9.要确保微量加样器的准确性,可以使用蒸馏水和电子天平进行确定(由于蒸馏水不含杂质,人ELISA试剂盒温度环境为20%左右时,lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加样器都应该将其zui高量程和zui低量程进行确定。
    10.要尽量做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
    11.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。

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